Ekspozycja ma przybliżyć odbiorcom wszechstronną twórczość mistrza, zarówno w zakresie różnorodnej tematyki, jak i wielu stosowanych przez niego technik malarskich i graficznych. Prezentowane na niej są m.in. obrazy olejne, akwarele, gwasze, litografie, akwaforty, akwatinty i rysunki. Dzieła pochodzą z niemal wszystkich okresów twórczości Wyczółkowskiego, począwszy od akwareli powstałej na złote gody dziadków artysty z 1870 roku, poprzez okres ukraiński, a kończąc na grafikach i akwarelach przedstawiających naturę powstałych w ostatnich latach jego życia. Na ekspozycji znalazł się również jeden z najpopularniejszych obrazów Wyczółkowskiego Wiosna – wnętrze pracowni artysty. Następną grupę stanowią prace prezentujące motywy architektoniczne i zabytkowe. Wyczółkowski portretujący widoki miast, np. Krakowa, Warszawy, Lublina i miejsc ważnych dla historii Polski jak Wawel, starał się budować tożsamość narodową rodaków.
Główną oś ekspozycji stanowią pełne emocji i charakteru portrety przyjaciół i znajomych artysty m.in. portret Zofii Cybulskiej. Wielkoformatowy obraz ukazuje modelkę w codziennym stroju i rzadko stosowanej w malarstwie pozie. Najistotniejsza jest jednak próba ukazania jej stanu emocjonalnego. Na wystawę wybrano również kilka autoportretów Leona Wyczółkowskiego, który rejestrował często swoje nastroje w ramach ćwiczeń i jako element samopoznania. Zaprezentowano również przedmioty osobiste artysty m.in. okulary, paletę, szkicowniki oraz listy. Kolejną część ekspozycji stanowią prace związane z Ukrainą, wykonane w różnych technikach i stylach, ilustrujące jeden z najważniejszych okresów w twórczości malarza. Z tego czasu pochodzą obrazy o charakterze impresjonistycznym, w tym słynne Kopanie buraków. Specjalnie dla odbiorców wybrano dzieła związane z regionem Podlasia, przede wszystkim Białowieżą dla ukazania związków artysty z regionem.